本发明涉及一种芥末油纳米乳及其制备方法。本发明的纳米乳中主表面活性剂为聚氧乙烯氢化蓖麻油RH40、卵磷脂、泊洛沙姆中的一种或者一种以上的混合物;油相为芥末油或溶有芥末油的油酸溶液。其质量百分比组成为:表面活性剂相占1.38%~22.5%,油相占0.196%~2.63%,水相占75%~98.4%。其制备方法为先将主表面活性剂与助表面活性剂按照比例混合均匀,再加入芥末油或溶有芥末油的油酸溶液并超声分散,最后向其混合物中加入超纯水,得到芥末油水包油型纳米乳。本发明制备的芥末油纳米乳改善了芥末油的刺激性气味,避免了芥末油的挥发,可在食品及药品的抑菌上得到应用。